產品介紹

NCMSpeed E.coli Transformation Kit 是新賽美生物科技有限公司研發可實現快速轉化的感受態細胞制備試劑盒，適用于實驗室多種菌株，特別是 DH5α , JM109, DH10B, XL1-Blue 等。特殊的感受態試劑配方，使轉化效率可達到 10 8 -5X10 9 cfu/ug pUC19 DNA, 轉化整個過程不需冰浴、熱激和孵育等步驟，最快 30 秒即可

實現完美的轉化。

產品特色

1.轉化快：最快可 30 快速轉化，不需冰浴、熱激和孵育步驟。

2.效率高：達到 108 -5X10 9 cfu/ug pUC19 DNA。

3.穩定性好：-70℃冰箱可保存一年時間。

4.安全性高：不需液氮處理，直接超低溫凍存即可。

操作步驟

以 50ml 的 E.coli 培養體積為例

感受態細胞制備操作步驟：

1. 將 0.5ml 新鮮過夜培養的 E.coli 菌接種于 50ml SOB 培養基中（1:100 比例接種），在搖床中以 25℃，250 rpm 條件下振蕩培養，直至 OD 600nm 達到 0.4-0.6。

★注意: 在 25℃，250 rpm 振蕩培養可提高感受態細胞的效率；制備感受態的 E.coli菌株應處于生長的對數期，即 OD 600nm 達到 0.4-0.6，大于 0.6 時的細菌狀態變差，小于0.4 時細菌量較少，均不適合制備感受態細胞。

2．將第一步中的 E.coli 培養基轉移至冰上，冰浴 10 分鐘預冷細菌。然后在 4℃條件下，3000rpm 離心 10 分鐘。

★注意：制備感受態細胞時所有步驟都要在低溫條件下進行，操作時動作要輕柔，不可劇烈地處理 E.coli 菌體。

3. 棄去離心后的上清，加入 15ml E.coli Competent Buffer, 輕柔地重懸細菌沉淀；重復實驗步驟 2 的操作。

4. 徹底地棄去上清，加入 5ml E.coli Competent Buffer，輕柔地重懸細菌沉淀。

5. 在冰上以 100ul 或 200ul 的體積分裝 E.coli 的懸浮液，直接凍存感受態細胞至-70℃超低溫冰箱中（勿用液氮處理感受態細胞）。

轉化步驟

多種轉化形式可選：30 秒極速轉化；5 分鐘快速轉化；常規轉化。

保存條件

低溫運輸，4℃保存，有效期 12個月。

注意事項

1. E.coli 菌株影響感受態效率不同的菌株制備的感受效率差異不同，像 DH 5α ,JM109, DH10B,XL1-Blue ,XL10 Gold,TG1 等菌株，使用 NCMSpeed E.coli Transformation Kit 制備的感受態效率較高。

2. 菌株培養條件

菌株培養時，用營養更豐富的 SOB 培養基；在 25℃，250rpm 振蕩培養，會使 E.coli菌處于最佳生長狀態，更適宜用于制備感受態細胞

3. 預熱平板可提高轉化效率

在轉化前，將 4℃保存的平板轉移到 37℃培養箱中預熱一段時間，可提高轉化時的效率。

4. 轉化時加入 C SOC 培養基

在做轉化實驗時，加入營養豐富的 SOC 培養基至 DNA-感受態轉化混合液中，增強感受態細胞的生長及吸收 DNA 的能力。

附錄：

SOB 培養基配制

1. 組份濃度：2%（W/V）Tryptone ；0.5%（W/V）Yeast Extract；0.05%（W/V）NaCl；2.5 mM

KCl；10 mM MgCl 2

2. 配制方法：

① 配制 250 mM KCl 溶解：在 90 ml 的去離子水中溶解 1.86 g KCl 后，定容至 100 ml。

② 配制 2 M MgCl 2 溶液：在 90 ml 去離子水中溶解 19 g MgCl 2 后，定容至 100 ml，高溫高壓

滅菌。

③ 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中：Tryptone 20g；Yeast Extract 5g；NaCl 0.5 g 。

④ 加入約 800 ml 的去離子水，充分攪拌溶解。

⑤ 量取 10 ml 250 mM KCl 溶解，加入到燒杯中。

⑥ 滴加 5 N NaOH（約 0.2 ml），調節 pH 值至 7.0。

⑦ 加去離子水將培養基定容至 1 L。

SOC 培養基配制

1. 配制 1M 葡萄糖溶液：在 90ml 去離子水中溶解 18g 葡萄糖，充分溶解后定容