產品介紹 

新賽美生物生產的蛋白裂解及上樣緩沖液(ProtLytic Protein Lysis and Sample Loading，1X)，是一種經過改良的以溴酚藍為染料 的可直接裂解蛋白且直接上樣的緩沖液。可以直接用于細胞或組織樣品的裂解，并用于后續常規的 SDS-PAGE 蛋白樣品的上樣。 直接裂解蛋白樣品的優點是比較便捷；缺點是裂解好的蛋白樣品不能用常規的 Bradford 法或 BCA 法測定蛋白濃度。這樣蛋白 上樣量的均一性就較難控制，需要借助考馬斯亮藍等的染色結果或 Western 的檢測結果，來調整上樣量。該產品是還原性的， 加入了 TCEP 的還原劑，替代了傳統的 DTT 或 2-ME，還原劑 TCEP 無難聞氣味，穩定性更高，還原效果更佳 。

操作步驟

1. 取適當量的蛋白裂解及上樣緩沖液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM。 

注意：該產品不含蛋白酶等抑制劑，根據需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制劑（蛋白酶抑制劑混合液,貨號：P001）。 

2.對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔 加入 150-250 微升比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。 

3. 對于懸浮細胞：離心收集細胞，將細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕 彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。 對于組織樣品： (a). 把組織剪切成細小的碎片。 (b) 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度 的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)  (c) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。充分裂解后，將樣品收集到一潔凈離心管中。

4. 100℃或沸水浴加熱 5-10 分鐘，以充分變性蛋白。 

注意：煮沸前通常會發現蛋白樣品內有粘稠的半透明狀物體，通常在本上樣緩沖液內沸水浴煮沸 8-10 分鐘后可以確保該粘稠的 半透明狀物體消失，以便于后續的上樣操作。 

5.冷卻到室溫后，室溫稍離心一下以沉淀可能出現的雜質等，上清即可直接上樣到 SDS-PAGE 膠加樣孔內即可。通常電泳至藍色染料 到達膠的底端處附近即可停止電泳。 

注意事項：

1. 裂解液的裂解產物中經常會出現一小團膠狀物，屬正常現象。

2．為獲得最佳的實驗效果，可適當分裝使用，以盡量避免反復凍融。

3．PMSF 應現用現加,需自備 PMSF。

4．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。

5．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸，請立即用流水沖洗， 再向醫療保健結構咨詢